多通道熒光定量PCR儀因操作方便、運行速度快、實驗結果準確,受到越來越多的分子生物學研究者青睞。在實驗技術成熟的今天,也許對你來說,難得不是實驗技術上的問題,而是選擇哪一種熒光定量PCR儀,面對各種不同性能的產品,您又該如何選擇呢?
選擇PCR儀前,首先建議大家走出認識熒光定量PCR的兩個誤區:
誤區一:儀器通道越多越好
隨著PCR技術的成熟運用,多重擴增越來越熱鬧,熒光定量PCR儀也不能幸免。從單通道熒光定量PCR儀發展到如今各個廠家都推出4通道、5通道甚至6通道熒光定量PCR儀,眼花繚亂的選擇讓人無所適從,就有人一不小心走進了“通道越多越好”的誤區。
考慮多通道熒光定量PCR儀的通道數的時候也應該從實驗室實際情況出發,多重PCR并非人人適用、人人可用,因為它使實驗復雜化了。
誤區二:PCR儀無需梯度功能
對于使用染料法的定量PCR反應,雖然有各種各樣的PCR引物設計軟件或者經驗公式計算熔解溫度(Tm值),但運用的公式不同、引物序列不同,Tm值的差異會很大。梯度PCR的出現部分解決了一些問題——在反應過程中每個孔的溫度控制條件可以在指定范圍內按照梯度變化,根據結果,一步就可以摸索出適合的反應條件。
使用有梯度功能的熒光定量PCR可以一次完成以往多次實驗才能完成的優化過程,簡化了摸索PCR反應條件的繁瑣實驗,既節省實驗時間提高效率,又節省實驗成本。