诺如病毒抗原快速检测试剂卡（免疫层析法）说明书

【包装规格】

20 测试/盒

【预期用途】

用于体外诊断。诺如病毒抗原快速检测试剂卡（免疫层析法）是用免疫层析的方法快速定性

测定人粪便样本中，基因1型（GGI）和基因2型（GGII）的诺如病毒。该试剂可以协助诊断胃肠

炎，分析有疑似诺如病毒胃肠炎症状的儿童和成人的粪便样本。

【检验原理】

（免疫层析法）为快速、多步法侧流免疫层析检测，应用了抗

诺如病毒抗原的单克隆抗体。在加样孔旁的反应窗内，有两条包被了固定抗体的平行线。检测线（T）包含了抗诺如病毒抗原的抗体。质控线C包含了抗鼠IgG的抗体。酶标记物1包含了生物素化的抗诺如病毒抗原的抗体，酶标记物2是由结合了辣根过氧化物酶的链霉菌抗生物素蛋白组成。检测过程中，先从已经准备好的粪便样本悬浊液中，吸取一定量的上清液，与一定量的酶标记物1混合，加入检测卡较小的窗口中（加样孔）。经过室温下10 分钟的孵育后，样本和酶标记物混合液被检测膜吸收，并在过滤片上移动。在这个过程中，诺如病毒阳性标本中的抗原-酶标记物复合物，与检测线上固定的抗诺如病毒抗体结合，没有结合抗原的生物素化的抗体则结合在质控线上。之后加入酶标记物2，在室温下孵育1 分钟，结合了过氧化物酶的链霉菌抗生物素，与通过特异性抗体而固定在膜上的生物素结合。

在反应窗加入洗液，洗掉没有结合的过氧化物酶。如果测试为诺如病毒阳性，加入底物后三

分钟，在检测线（T）上就会出现蓝线，同时质控线（C）上也会出现蓝线。如果质控线没有变蓝，说明这次检测的操作存在问题，结果不可以用于诊断。

【主要组成成分】

试剂盒内的试剂足够进行20次检测

测试卡 Cassette 20次检测 内装20个独立包装的测试卡

稀释缓冲液 Diluent 30 ml 样本稀释缓冲液，氯化钠蛋白缓冲液，含0.1% Kathon CG;

开瓶即用，蓝色洗液 Wash 10ml 洗液，磷酸化的氯化钠，含0.1% Thimerosal，开瓶即用

酶标记物1 Conjugate│1 7ml 稳定蛋白溶液中的生物素标记的抗诺如病毒抗体，开瓶即用，

酶标记物2 Conjugate│2 5ml 稳定蛋白溶液中的链霉菌过氧化物酶，开瓶即用

底物 Substrate 7ml 过氧化氢/TMB，开瓶即用吸液管 Pipet 25支 每包中装有25支有刻度标记的一次性塑料吸样管

【储存条件及有效期】

2－8 °C保存，必须在有效期前使用。过有效期之后，产品的质量保证不再有效。同样，如果检测卡的外壳破损将会使检测卡潮湿，我们将不能保证检测卡适合使用。

有效期：6个月

【样本要求】

粪便样本必须使用没有任何添加剂的干净容器收集，试验前储存于温度应为2-8 °C。在病人症状出现后（腹泻和呕吐），应尽快进行样本采集，因为症状出现后1-3 天，病毒的清除达到zui大化。如果标本保存时间超过3 天，必须储存于-20 °C。在实验开始前，冷冻的样本必须充分解冻，回复至室温。与新鲜样本一样，复温的样本也必须在检测前，和试剂充混合。应避免样本多次冻融。

采用直肠拭子采集样本时，必须得到足够的粪便样本（大约100 mg）以确保检测进行。

【检测方法】

1.常规信息

检测前，样本、稀释缓冲液、试剂和检测卡必须恢复至室温（20 - 25 °C）。检测卡必须在即将使用前才可以从外包装中取出，检测卡一旦从外包装中取出或被使用，则不可以再次使用。检测不可以在阳光直射下进行。

2.准备样本悬浊液

取1 ml样本稀释缓冲液Diluent 加入贴好标签的试管内。对于液态粪便样本，可用盒内的一次性吸液管Pipet 吸取100 μl样本（至吸液管的第二个增粗处），悬空滴加于事先已加入提取缓冲液的标记试管中；对于固态粪便样本，取50-100mg样本（豌豆大小）加入缓冲液中。样本必须被混匀，可利用试管反复吸放，或者用漩涡混匀器将粪便悬浮液混匀。至少沉淀2分钟后，取200- 500 μl上清液置于另一干净试管中（或者未包被的微孔中）。

3.将检测卡Cassette从外包装中取出，将其放置在水平的垫子上。

4.用已经处理过同一样本的一次性吸管，从粪便悬浊液中吸取250 μl上清液（*个标记处），

加入干净的、标记的试管中。

5.在试管中加入6 滴酶标记物1 Conjugate│1（滴加时保持小瓶垂直）。

6.通过吸放的方式将混合液*混匀后，用一次性吸管将其全部吸出，以缓慢平稳连贯的水流，注入检测卡的加样孔中。将吸管倾斜约 45°}，管口指向反应窗，这样混合物就可以全部流至反应窗内。__

7.将检测卡在室温下（20 - 25 °C）孵育10 分钟。确保反应窗的检测膜已被样本混合液充分浸湿，否则请将100 μl 稀释缓冲液滴入加样孔中。

8.在反应窗中加入4 滴酶标记物2 Conjugate│2（滴加时保持小瓶垂直），再于室温下孵育至少1分钟。

9.在反应窗中，加入10滴洗液 Wash，待洗液被*吸收后，再进行后续操作。

10.在反应窗中加入6 滴底物 Substrate（滴加时保持小瓶垂直）。

11.之后的3分钟内，读出检测结果。在3分钟后出现的有色条带，没有诊断意义

【参考值（参考范围）及检验结果的解释】

1. 在加入底物后3 分钟之内，在良好采光直视下读出的检测结果，是zui可靠的。

2. 查看在反应窗的“C"标记处，是否有出现蓝色的条带（所谓的内部质控线），在反应窗的“T"标记处是否出现蓝色的条带（所谓的检测线）。颜色的强度可能会由浅变深。

3. 阳性结果：加入底物之后3 分钟内，如果同时出现两条蓝色的条带（检测线“T"和质控线“C"），可判别为阳性结果。颜色可由浅变深。如果条带只有部分清晰出现，也可以解释为阳性。膜的其他颜色改变或其他部位的阴影，都不能解释为阳性结果。

4. 阴性结果：加入底物的3 分钟后，就可以开始判别是否为阴性结果或无效结果了。如果只在反应窗的质控带“C"处出现蓝色的条带，在检测带“T"处没有蓝色条带出现，则可判定为阴性结果。阴性结果说明，在样本中没有诺如病毒的抗原存在，或抗原的量低于检测限。

5. 无效结果：在反应窗的检测带“T"和质控带“C"处，均无蓝色条带出现，或者只在检测带

“T"出现条带，这两种情况均说明检测无效，需要用新的检测卡重新进行检测。

诺如病毒抗原快速检测卡（免疫层析法）检测结果的解释：

【检验方法的局限性】

（免疫层析法）用于检测基因1 型和基因2 型的诺如病毒，如

果病毒量没有低于试剂的检测限，则可以检测该种病毒是否在粪便样本中出现。粪便样本是否取样于胃肠炎病人的症状表现期，对结果的影响是非常重要的。检测中出现蓝色条带的颜色强度，不能反应临床症状的严重程度，只能提示粪便样本中的病毒抗原量。条带的蓝色可以从很浅的颜色变为很深的颜色。

阳性结果不能排除存在其他病原体感染。在样本中可能同时存在两种及以上的病原体，需要

进行鉴别的检测以确诊。双重或多重感染的症状会比一种感染引起的症状严重。

阴性结果不能排除诺如病毒的存在或诺如病毒是引发胃肠炎的原因。此种情况可因以下原

因发生：间歇性病毒排出、或者粪便样本中病毒含量过低，样本采集时间不当，运输或储存条件

不适合。如果病人高度怀疑病原体感染，应再重新留便复查。

【产品性能指标】

在验证实验中，用（免疫层析法）检测113 例粪便样本。样本

从胃肠炎患者的粪便中采集，既有散发病例，也有爆发病例。样本收集于2007-2008 年的冬季，在德国汉堡的城市地区采集。在当地的卫生研究所，用RT-PCR 的方法检测新鲜的样本后，将样本冻存。2008 年7 月，将冰冻的样本融化后，在与之前相同的实验室，用（免疫层析法）和已上市的诺如病毒抗原检测试剂盒（酶联免疫法），同时进行检测。

【注意事项】

1. 仅用于体外诊断。

2. 实验必须由经过专业培训的人员操作。必须严格按照医学实验室的规章制度操作。

3. 产品操作时必须严格按照说明书操作。

4. 样品稀释缓冲液中含有Kathon CG 作为防腐剂，此物质不能接触皮肤或粘膜。

5. 样本和试剂不可以用嘴吸取。

6. 样本和试剂避免接触受伤的皮肤或者粘膜。

7. 处理样本时应该戴一次性手套，完成试验后要洗手。

8. 禁止在样本和试剂实验区域内吸烟、吃东西或喝水。

9. 所有试剂和材料如果接触有潜在感染性的样本，应与样本一样，立即用适当的消毒剂（如：

次氯酸钠）或者高压高温121℃至少1 小时处理。

10. （免疫层析法）必须在效期内使用。所有的试剂都被调整

为zui适宜的活性状态。稀释或改变这些试剂将减少其活性。如果不按照说明中的时

间和温度进行操作，将会导致错误的结果。

11. 不同批号的（免疫层析法）试剂盒中的试剂不可以混用。

12. 试剂和样本必须避免微生物的污染，否则将会影响检测结果。

13. 吸取每个样本时，必须使用不同的吸管，以防止交叉污染及错误结果

14. 每个检测卡只可使用一次

【公司名称】 广州健仑生物科技有限公司

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