脑膜炎奈瑟菌血清群B鉴定

广州健仑生物科技有限公司

（广州健仑生物科技有限公司是集研制开发、销售、服务于一体的优良企业,公司产品涉及临床快速诊断试剂、食品安全检测试剂，违禁品快速检测，动物疾病防疫检测试剂，免疫诊断试剂、临床血液学和体液学检验试剂、微生物检验试剂、分子生物学检验试剂、临床生化试剂、有机试剂等众多领域，同时核心代理Panbio、FOCUS、Qiagen、IBL、CORTEZ、Fuller、Inbios、BinaxNOW、LumuQuick、日本富士、日本生研等多家有名诊断产品集团公司产品，致力于为商检单位、疾病预防控制中心、海关出入境检疫局、卫生防疫单位,缉毒系统，戒毒中心，检验检疫单位、生化企业、科研院所、医疗机构等机构与行业提供*、高品质的产品服务。此外，本公司还开展食品、卫生、环境、药品等多方面的第三方检测服务。）

【储藏条件】

2~8℃避光保存，在标明的有效期内使用。

【有效期】

24个月

【产品名称】

通用名：脑膜炎奈瑟菌诊断血清英文名：antisera for N.meningitidis

【产品说明】

本套血清用于A、B、C、W、X、Y等6个常见血清QUN（serogroup）脑膜炎奈瑟菌的血清群鉴定，将相应血清群脑膜炎奈瑟菌制备灭活抗原，免疫家兔所得，血清产品经免疫吸附去除了非特异性凝集成分，具有效价高，特异性强的特点。

脑膜炎奈瑟菌血清群B鉴定

【规格】

每种血清群1瓶，每瓶2ml，均为使用液。

【使用方法】

1.产品在使用前，由冰箱拿出，恢复温度到室温后使用。

2.样品分离培养物，经镜检和生化鉴定，确定为脑膜炎奈瑟菌后，再进行血清分群检测，如果未能确定为脑膜炎奈瑟菌，不宜直接进行血清凝集检测，以免产生假阳性结果。

3.待鉴定细菌在血平板或巧克力平板上，5% CO₂，培养48小时。

4.用酒精擦拭玻璃片。

5.用蜡笔或防水笔将玻璃片分为8个方格。

6. 在玻片每个方格的下半部分，用移液器加5%的福尔马林溶液（基于生物安全目的）。

7. 用无菌或一次性10μl接种环挑取BAP平板上过夜培养的细菌菌落。

8. 在玻片上将细菌与5%的福尔马林溶液混匀，混匀后的液体应该不透明，在加抗血清前应保持细菌悬液不干燥。

9. 在玻片的上方加10μl血清群特异的抗血清，同时在阴性对照侧加BS或者生理盐水。

10. 缓慢的混合细菌悬液和抗血清，使上部的抗血清和下部的细菌悬液充分混合1-2分钟。不要做旋转晃动，以免不同血清群的血清会相互混合污染。

11.在灯光下，黑暗背景条件下观察结果。1-2分钟内呈2+及以上凝集现象为阳性，1-2分钟内呈现2+以下凝集现象为阴性。如果过了2分钟，才发生的凝集反应按阴性处理。

【凝集反应的强度等级】

当抗血清与细菌接触，会引起凝集反应，使细胞（细菌）凝集或呈簇，细胞（细菌）上清液变得清亮，细胞悬液浓度或使用的抗血清浓度不同，会产生不同的强度的凝集反应，见图示

4+ 所有的细胞都发生凝集，细胞悬液清亮。

3+ 75%的细胞发生凝集，细胞上清略微浑浊不清。

2+ 50%的细胞发生凝集，细胞上清略微浑浊不清。

1+ 25%的细胞发生凝集，细胞上清略微浑浊不清。

+/- 少于25%的细胞发生凝集，可见有颗粒状的成分。

0 没有肉眼可见的凝集，上清悬液浑浊、平滑。

【血清群确定】

1. 1-2分钟内，出现3+或4+凝集为阳性反应（强阳性反应）。对于B群脑膜炎奈瑟菌来说，如果出现2+及以上的凝集则可认为阳性。

2. 阴性反应是+/-、1+ 或 2+（弱凝集）的凝集程度。

3. 当菌株仅与一种抗血清出现凝集，但和生理盐水不凝集时才能鉴定为该种血清型。

4. 如果不能确定血清群，菌株记为不能分群脑膜炎奈瑟菌（NG）。

5. 关于不能分群脑膜炎奈瑟菌（NG）菌株。

6. 在生理盐水中凝集，无论与任何抗血清发生强反应，都应标记为自凝菌。

7. 在生理盐水中不自凝，和多种血清出现凝集，记为NG。

8. 不和生理盐水凝集，也不和任何一个血清凝集也记作NG。

【结果难以判断时解决方案】

脑膜炎奈瑟菌具有可变性（有荚膜与无荚膜，小菌落与大菌落，慢生长与快生长，强凝集与弱凝集），有时候很难清除解释结果，一些建议如下：

1. 挑取同一平板上的另一个细菌克隆进行重复凝集试验。

2. 如果玻片上的结果不明确，将试管中配置悬液，重复该试验。

3. 加20µl抗血清直接涂于玻片上，直接加一环细菌进行混均凝集。

4. 再次培养，第二天进行重新试验。

5. 如果当天的平板上有各种大小不一的菌落，每种菌落再次分离纯培养，第二天每种菌落进行试验。大菌落一般会有比较好的凝集反应，小菌落次之。

6. 如果试验中的问题还是不能解决，应当和对照菌株同时进行试验，确保试剂的正确性。

【血清质量控制】

在对未知的菌落进行血清分群之前，应选用一套脑膜炎奈瑟菌参考菌株（A, B, C, W, X, Y）和一株可分群的脑膜炎奈瑟菌进行质量控制检测。操作步骤：

1. 新购进的每一批次抗血清要用参考菌株进行检测。

2. 半年后重复质量控制检测

3. 如果血清管暴露于超过4℃环境，或者怀疑血清被污染时，也要对血清进行重新的质量控制。

4. 关于血清分群和质量控制，每一批次的抗血清需要使用所有的参考菌株进行实验室验证，记录质量控制验证结果。

【血清质量控制检测结果判读】

1. 通过质量控制检测

与同源性的抗原反应，1-2分钟内，出现3+或 4+程度的凝集；单一血清群的抗血清不与其他血清群的脑膜炎奈瑟菌反应，不与NG菌株凝集反应，盐水不自凝。

2. 分群血清质量控制检测失败

如果抗血清与一种或多种参考菌株凝集反应，或/和NG参考菌株反应，盐水自凝，则血清不能使用。

【其他所需材料】

洁净玻片、生理盐水（0.85%的氯化钠溶液）、5%的福尔马林溶液、接种环或移液器。

【注意事项】

1. 本产品只能作为脑膜炎奈瑟菌血清型判定的辅助方法，zui终的判定需形态学、生化方法和血清学方法共同进行。

 2. 本产品应避免冷冻。反复冻融会使血清产生沉淀。

3. 本产品在保存过程中可能会产生浑浊或沉淀，这并不表示该产品已被污染。离心或者过膜去掉浑浊或沉淀后，可以正常使用。

4. 本产品含有0.1%*作为防腐剂，丢弃时需倒入下水管，并用大量的水冲洗下水管。

广州健仑生物公司提供SSI血清产品，包括沙门氏菌，志贺氏菌，大肠杆菌，肺炎链球菌，嗜血杆菌等。并且提供德国有名血清品牌SiFin的核心血清产品，德国SiFin血清质量好，实验*，已被各高校实验室，研究所列为推荐血清产品！详情可咨询工作人员！

我司还提供其它进口或国产试剂盒：登革热、疟疾、流感、A链球菌、合胞病毒、腮病毒、乙脑、寨卡、黄热病、基孔肯雅热、克锥虫病、违禁品滥用、肺炎球菌、军团菌、化妆品检测、食品安全检测等试剂盒以及日本生研细菌分型诊断血清、德国SiFin诊断血清、丹麦SSI诊断血清等产品。

广州健仑生物长期供应各种违禁品检测试纸、违禁品检测卡、违禁品检测试剂盒、药筛试纸、药筛试剂盒、吗啡检测试剂盒、巴比妥检测试剂盒等。检测范围：吗啡、巴比妥、尼古丁、KET、mamp、MDMA、BZO、THC、MTD、BAR、MDMA、AMP、BUP、PCP、TCA、OXY、MET等等。

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呼吸道合胞病毒、副流感病毒、流感病毒是引起儿童下呼吸道感

染和毛细支气管炎的常见病毒，仍然有超过1/3的病例不能明确病

原。2005年Allander等 首先从呼吸道疾病患者的呼吸道分离出

新的细小病毒，迄今来自欧洲、北美、中东、亚洲以及非洲的数

据均发现，从呼吸道感染患者呼吸道分泌物中发现人类博卡病毒

感染。大多数的研究显示，大约l%～8%的呼吸道标本中发现hBoV

，大多数来自儿童。国内目前有l4篇关于博卡病毒的研究文章，

证实hBoV感染是引起小儿下呼吸道感染的重要病毒病原之一，邓

昱等 *发现在持续喘息的患儿呼吸道分泌物中，hBoV的阳性率

高达31%。
hBoV与其他呼吸道病毒合并感染十分常见，泰国的监测显示，4．

5%的肺炎显示hBoV阳性，其中83%与副流感病毒、鼻病毒及RSV混

合感染。hBoV感染临床表现以高热、阵咳为主，实验室检查外周

血白细胞、C一反应蛋白、血沉和血生化指标大多正常。与RSV感

染的患儿相比，hBoV感染发热例数相对多，但其他的临床症状与

RSV相似。hBoV血清阳性提示，hBoV可能引起病毒血症；hBoV感

染除表现下呼吸道症状外，也可引起肠道等其他相关症状。
随着检测手段的提高，有更多的新病毒被发现，包括与hBoV不同

的一种微小病毒PARV4、2种1Tr病毒样病毒、2种新的KI和WU、

mimi病毒等，其流行病学及其临床特征有待进一步研究。总之， 

目前已很清楚hMPV 是重要的病毒病原，可导致严重的疾病，需要

研制相关的疫苗及抗病毒的药物以防治偏肺病毒；hCoV—NL63和

hCoV—HKU1与人类上下呼吸道感染相关，但它们的疾病负担尚不

清楚；hBoV可能引起全身疾病的发生。随着新病毒病原的发现丰

富了临床病毒病原学的研究，为临床病原学诊断与寻找新的抗病

毒方法提出了挑战。
Respiratory syncytial virus, parainfluenza virus, influenza virus is caused by lower respiratory tract sensation in children

Common infections with bronchiolitis and bronchitis, there are still more than 1/3 of cases can not be clear disease

original. In 2005, Allander et al were first isolated from the respiratory tract of patients with respiratory diseases

The new parvovirus, so far from Europe, North America, the Middle East, Asia and Africa

It has been found that human Boca virus is found in respiratory secretions of patients with respiratory infections

infection. Most studies show that hBoV is found in about 1% to 8% of respiratory specimens

, Mostly from children. Currently, there are 14 articles on BocA virus research articles,

Confirmed hBoV infection is caused by one of the important viral pathogens in children with lower respiratory tract infection, Deng

Yu et al. First found that in patients with persistent wheezing respiratory secretions, the positive rate of hBoV

Up to 31%.
Infection with hBoV and other respiratory viruses is very common, and surveillance in Thailand shows that 4.

5% of pneumonia showed hBoV positive, of which 83% with parainfluenza, rhinovirus and RSV

Infected. Clinical manifestations of hBoV infection with high fever, cough-based, laboratory examination of the periphery

Blood leukocytes, C-reactive protein, ESR and blood biochemical markers are mostly normal. Sense with RSV

Compared with children infected with hBoV infection, the relative number of cases of fever, but other clinical symptoms and

RSV is similar. hBoV seropositive suggests that hBoV may cause viremia; hBoV flu

In addition to the performance of lower respiratory tract infection, but also can cause other symptoms such as the gut.
As detection techniques improve, more new viruses are found, including different from hBoV

Of a parvovirus PARV4, 2 kinds of 1Tr virus-like virus, two kinds of new KI and WU,

mimi virus, its epidemiology and clinical features remain to be further studied. In short,

It is now well understood that hMPV is an important viral pathogen that can cause serious illnesses and needs

Development of vaccines and antiviral drugs to control metapneumovirus; hCoV-NL63 and

hCoV-HKU1 is associated with human upper and lower respiratory tract infections, but their disease burden is not yet

Clear; hBoV may cause systemic disease. With the discovery of new viral pathogens abundance

Rich in clinical viral etiology research, for the clinical diagnosis of etiology and looking for new resistance

Poisoning methods pose challenges.