西尼罗河病毒IgG、IgM联合诊断试剂盒

广州健仑生物科技有限公司

检查

1.实验室检查

白细胞数减少，脑炎型者脑脊液中淋巴细胞增多，蛋白增高。

2.免疫学检查

利用血清学抗体检测方法，常用ELISA（酶联免疫吸附实验）法，采用患者急性期和恢复期双份血清，两份血清同时进行检测，以恢复期血清较急性期特异性IgG抗体滴度升高4倍以上为阳性，有助于本病的诊断。

3.病原学检查

自潜伏末期至发病后第5天，从患者血液或脑脊液中分离出病毒，阳性率较高，对新分离病毒的鉴定一般采用已知血清进行中和实验。

4.分子生物学检查

RT-PCR（逆转录-聚合酶链反应）法检测，通过设计西尼罗河热病毒特异引物对血清或脑脊液标本进行RT-PCR试验，阳性率高，具有特异性诊断价值。

用途

西尼罗(WN)病毒IgG ELISA，利用了西尼罗重组抗原检测人体血清或血浆中的西尼罗抗体。本实验仅用于辅助诊断人感染了西尼罗病毒，不用于筛查血液或血液成分。仅供专业人员体外诊断使用。

概述

 感染了西尼罗病毒会导致包括脑炎等一系列症状的疾病，西尼罗病毒在世界广泛传播，已在50多个国家检测出该病毒。本试验经CDC提供的试剂检验与验证。本试验使用了一种称为WNRA的重组抗原，它可以作为西尼罗病毒感染的快速血清学指标，WNRA蛋白是一种重组抗原，它是由含有西尼罗病毒两个抗原的序列多肽构成。

实验的原理

检测西尼罗病毒IgG ELISA 是基于两步夹心法原理制造的。

提供的材料

• 微孔板（96孔 12x8）：即用  每孔均包被结合西尼罗重组抗原的单抗。2－8℃下保存至保质期。

注意：WNRA和NCA已包被于微孔板。

• IgG样品稀释液：1支 25ml 即用 2-8℃下保存至使用。
• IgG阴性质控：1支 30ul  2-8℃下保存至使用。要长时间储存，将其分装于小瓶里，在-70℃下储存。
• IgG阳性质控：1支 30ul  2-8℃下保存至使用。要长时间储存，将其分装于小瓶里，在-70℃下储存。
• 洗涤液（10X）：1瓶 120ml  2－8℃下保存至使用。
• EnWash：1瓶 20ml 2－8℃下保存至使用。
• 酶联物：一瓶6ml 即用 2－8℃下保存至使用。
• TMB底物液： 1支 9ml 即用  2－8℃下保存至使用。
• 终止液；1支6ml 即用  2－8℃下保存至使用。

试剂应避免反复冻融。

西尼罗河病毒IgG、IgM联合诊断试剂盒

操作步骤：

• 标记将要使用的板条，注意微孔板已经按照统一排列，如下所述包被西尼罗抗原和质控抗原。

• 将血清样品﹑阴性质控和阳性质控同样地用样每孔加入50ul稀释后的样品，以下为一个血清样品使用一个板条的*。
• 品稀释液按1：300稀释。

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新合成的蛋白质可以用放射  免疫测定Western印迹，体内代谢标记－免疫沉淀或者细胞  提取液中酶活性的测定等方法来进行分析，如果测定中有  重复品或者转染细胞要经过多种不同条件或在一段时间历  程以内取不同时间进行处理，就要避免皿与培养皿之间转  染效率的偏差。在这些情况下，转染大片的单层细胞  （90mm培养皿），培养24h后用胰蛋白酶进行消化，再分接  到若干较小的培养皿上。②稳定转化：在非选择性培养基  中培养18～24h，使所转移基因得到表达之后，用胰蛋白酶  消化细胞，种入适当的选择性培养基中。这种培养基在2～  3周内每2～4d须更换1次，以便除细胞残骸并使抗性细胞集  落得以生长。可以克隆单个细胞集落，增殖后进行测定。  可以用冰预冷的甲醇将仍保留在培养皿内的细胞固定15min  ，再于室温用10%Giemsa染色15min，zui后用自来水冲洗，  这样即可得到细胞集落数的*记录。Giemsa染液可用PBS  或水现用现配，并用Whatman 1号滤纸过滤。重新接种细胞  以便取得分隔良好的细胞集落所要求稀释倍数，主要由稳  定转化的效率来决定。