粪便总 DNA 提取试剂盒

 Fecal Total DNA Extraction Kit

（适用于从各种粪便中提取总 DNA）

粪便总 DNA 提取试剂盒

试剂盒组成：50 (50 次)

储存条件

本试剂盒在室温（15-25 ℃）下可保存一年。 

产品特点：

TM Fecal Total DNA Extraction Kit 采用*的疏水膜技术，*去除粪便中的各种干扰物，提取高纯度的 DNA。试剂盒采用了*的缓冲系统，可从多种不同类型的粪便样中快速提取总 DNA (包括各种类型的细菌、真菌和脱落细胞)等。

注意事项：

1.实验前准备工作：详细阅读该手册熟悉各步骤，并准备好所有的试剂盒组分、研钵、研棒、药匙、1.5 ml 和 2 ml 灭菌离心管以及 37 ℃和 65 ℃ 的温浴条件。

2.KSL1, KBL1 和 KW1 在低温时可能产生混浊或沉淀，在 37-65 ℃温浴片刻即可。

3.Buffer KW *次使用前请按瓶上标签加入 50 ml 无水或 95%乙醇。每次使用后，请立即拧紧盖子。

操作步骤：

（一）平衡吸附柱

1.取一 TM Mini Column 柱装在一个 2 ml 收集管上（已备）。加入 300 μl Buffer KB 平衡液至柱子内，室温 13 000 rpm 离心 1 min，使平衡液*流过柱子。弃收集管中的滤液，将空柱套回收集管内。

注意：柱子不平衡，将导致 DNA 产率减少。

(二) 样品处理

2.可根据不同条件选择以下方法：

A：研磨法：

1)液氮研磨: 取 10 - 30 mg 新鲜粪便样品于研钵中，加入少量液氮， 迅速研磨，待样品磨碎，再加少量液氮，再研磨，如此三次。将样品迅速转入 2 ml 离心管，加入 600-1000 μl Buffer KSL1，65℃水浴 15 min，其间混匀 2-3 次。然后 13,000 rpm,常温离心，5 min.

2)小心将上清液转至干净的 2ml 离心管，加入 1.0-1.5 倍体积的异丙醇， 混匀， 13,000 rpm, 3 min, 离心弃去去上清; 保留沉淀。在沉淀中加入 100μl KE,*溶解,然后加入 1000-1500 μl KBL1，13,000 rpm, 2 min，上清液待转移。

Ｂ.微波加热法

1)取 10 - 30 mg 新鲜粪便样品于 2 ml  离心管中，加入 600-1000 μl Buffer KSL1，强烈混匀，尽量不保留大的颗粒。65℃水浴 15 min，其间混匀 2-3 次。然后 13,000 rpm,常温离心，5 min.  上清和沉淀都要备用。

2)上清液转入新的 2 ml 离心管，待用。

3)将带有沉淀的离心管放入普通微波炉，大功率下，加热 1min；待结束后再加热另一个 1 min；然后第三个 1 min.

4)加入 600-1000 μl Buffer KSL1 于加热的离心管内，强烈混匀，65℃ 水浴 15 min，其间混匀 2-3 次。然后 13,000 rpm,常温离心，5 min. 上清备用。

5)上清转移至另一新的 2 ml 离心管。

6)在2) 和5) 的上清液中分别加入1.0-1.5 倍体积的异丙醇，混匀1 min, 常温离心 13,000 rpm, 3 min, 去上清; 保留沉淀。在沉淀中分别加入 100 μl KE 溶解。合并两个离心管的溶液。

7)加入 1000-1500 μl KBL1，混匀。一般不会出现沉淀，如有，离心弃去沉淀。

（三）吸附

3.将上清液转移到平衡过的吸附柱内，室温 13 000 rpm 离心 30 s，使裂解液*流过柱子。弃去收集管中的过滤液，将吸附柱套回收集管中。注意：1）室温太低可能造成 KBL1 混浊或沉淀，在 37 ℃温浴片刻即可。

2）如上清液体积过大，可以分成数次上柱，每次上样量不要超过 700

μl。

4.（可选）加入 30 μl  浓度为 20-50 μg/ml 的RNase A  于柱的膜上，37 ℃

放置 5-10 min。

注意：本试剂盒没有配备 RNase A 溶液。一般来说，这一步没有必要，因为本试剂盒的纯化柱对 RNA 没有吸附能力。如果实验要求不能残留微量RNA，可采用这一步处理。

(四) 漂洗

5. 加入 700 μl Buffer KW1，室温 13 000 rpm 离心 30 s，弃去收集管中的过滤液，保留柱。

7.加入 700 μl Buffer KW，室温 13 000 rpm 离心 30 s，弃去收集管中的过滤液，保留柱。注意：Buffer KW 在*使用之前必须加入 50 ml 无水或95%乙醇，并置于室温下保存。

8.（可选）重复用 700 μl 70%乙醇（室温）洗涤柱子，室温 13 000 rpm

离心 1 min。（注意：用 70%乙醇漂洗有利于提高 DNA 纯度）

9.弃去收集管中的滤液，将空柱套回收集管内。室温下，13 000 rpm 离心 2 min 以甩干柱子基质残余的液体。

注意：此步骤不可省，否则将导致乙醇残留于 DNA 中，影响后续反应。(五)洗脱

10.把柱子装在一个新的 1.5 ml 离心管上，加入 50 μl 的 KE（可用灭菌的 TE 10 mM Tris-HCl，pH 8.0 或纯水代替，纯水可预先用 NaOH 调 pH 值至 8.0），65 ℃放置 5-10 min，13 000 rpm 离心 1 min 以洗脱 DNA。（也可以将 KE 预热至 65℃，再加至膜上，可以减少放置时间至 1min）

注意：小心加 KE 到柱中吸附膜的中间部位，并确保液体将膜全部覆盖。

11.DNA 应保存于 4 ℃，若长时间保存，可冻存于-20 ℃。

本司部分DNA提取试剂盒，致电：020-8257 4011杨永汉

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四、诊断血清：沙门氏菌属诊断血清、志贺氏菌属诊断血清、大肠艾希氏菌诊断血清、霍乱弧菌诊断血清等。

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