日本脑炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）是流行性乙型脑炎（简称乙脑）的病原体。乙脑是严重威胁人畜健康的一种急性传染病，可引起母猪流产、死胎、早产，病死率高。猪感染JEV病毒后，在血清中能检测到特异性抗体。因此检测特异性猪乙脑抗体，可作为猪场乙脑疫苗的免疫监测及该病辅助检测指标。

       本试剂盒采用ELISA方法检测猪血清中的特异性抗体。本试剂盒灵敏度高，特异性强，重复性好，操作方便快速，可分多次使用。

【试剂组成】

【操作程序】

1．洗涤液配制用蒸馏水或去离子水将浓缩洗涤液（2号液）按1：10稀释，如取50ml浓缩液与450ml蒸馏水或去离子水充分混匀即为工作洗涤液。

2．样本稀释   用样本稀释液（5号液）将待检血清样本按1：100稀释，如取5ul样本与495ul样本稀释液，混匀。阴性、阳性对照品不用稀释，直接加样。

3．加样反应   每次试验设阴性对照2孔、阳性及空白对照各1孔（分别加入阴性、阳性对照及样本稀释液100ul）。样本检测孔每孔加已稀释血清样本100ul。37℃避光反应30分钟后，甩去孔内液体，每孔注满工作洗涤液洗涤3次，每次均需停留1分钟后再甩净，拍干。

4．加酶反应   除空白对照孔外，每孔加酶结合物（1号液） 1滴。37℃避光反应30分钟后，甩去孔内液体，如上洗涤，拍干。

5．显色反应   加底物液（3号液）和显色剂（4号液）各1滴，混匀，37℃避光显色10分钟。加终止液（6号液）1滴，终止反应（加终止液后，蓝色会变为黄色）并判读结果。

【结果判断】

       阴性对照呈无色或浅黄色，阳性对照呈明显黄色，表示试验有效。

       以空白对照调零，用酶标仪于450nm（630nm作参比波长）读取吸光度（A值）。待检孔A值大于阴性对照A值平均值的2.1倍者判为阳性。如阴性对照A值的平均值低于0.08时按0.08计算。

【注意事项】

1.试剂盒于2-8℃保存，有效期6个月。每次使用前应先平衡至室温。

2.未使用完的板条应密封保存。

3.试剂盒中终止液具有腐蚀性，要小心使用。

4.瓶盖每次使用后要拧紧，各瓶盖之间不可混用。不同批号试剂盒的试剂组份不可混用。

5.试验样本应为无染菌、无血脂、无溶血的血清。任何样本都应视为传染源妥善处理。

6. 37℃孵育时，建议使用水浴箱。如无条件，可在温箱中放置湿盒进行反应并同时用不干胶膜封盖板孔。

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